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纳米硒的体表里生物效应研讨

纳米硒的体表里生物效应研讨

作者:师大云端图书馆 工夫:2019-11-08 分类:硕士论文 喜好:2948
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【择要】硒是人类和植物所必须的微量元素,以硒代半胱氨酸的方式位于多种硒卵白的催化部位发扬其生理作用,但其养分范畴很窄,过量摄入会对生物发生肯定的毒性。而纳米硒作为一种有别于平凡无机硒和无机硒的新型硒方式,因其特别的理化特性而遭到普遍存眷,但是现在关于纳米硒生物学效应的研讨后果各别,相干代谢作用机制仍没有完全清晰。体外Caco-2细胞模子和形式植物斑马鱼已被普遍用以养分物质的代谢和生物学效应研讨。鉴于此,本文运用Caco-2细胞体外模子和卵白组学技能比拟研讨了纳米硒相较于别的方式硒(Se-Met和Na2SeO3)在细胞中的代谢差别,运用斑马鱼形式生物停止体内纳米硒的急性毒性研讨,旨在深化探求纳米硒绝对于平凡无机硒和无机硒的共同生物学效应及其发生机制,为纳米硒的使用奠基肯定实际根底。次要研讨后果如下:1、联合粒径剖析技能,探求了制备差别粒径纳米硒的差别办法。运用多糖模板法制备失掉了均匀粒径在130m左右的纳米硒粒子,运用卵白质模板法制备失掉了均匀粒径辨别在25nm、40nm和80nm左右的纳米硒粒子,后续实行接纳了卵白质模板法制备纳米硒。2、树立Caco-2细胞模子停止了三种方式硒(Nano-Se、Se-Met和Na2SeO3)在模子中的转运和摄取实验。37℃C下,相反浓度(0.1μmol/L)的三种方式硒在模子中的转运和摄取在AP-BL和BL-AP两个偏向上都是出现工夫(2h内)依赖。到2h为止,Caco-2细胞对Nano-Se和Se-Met的转运率(辨别为9.11±3.09%和7.33±2.36%)要明显高于Na2Se03(1.84±0.64%)(P<0.05),而Nano-Se和Se-Met之间的差别不明显;同时,Caco-2细胞对Nano-Se的摄取率(8.36±1.70%)明显高于Se-Met(4.75±0.41%)和Na2Se03(0.99±0.14%)(P<0.05),且Se-Met和Na2Se03之间也是差别明显的(P<0.05)。在37℃C下,Na2SeO3跨Caco-2细胞单层的表观通透系数Papp(AP-BL和BL-AP)都要明显小于其他两种方式的硒(P<0.05),而Nano-Se和Se-Met之间没有明显差别,且一切的Papp(AP-BL)/Papp(BL-AP)(R)都处在0.99-1.06之间,没有明显差别。3、联合双向电泳技能和质谱剖析研讨了差别方式硒(Nano-Se、Se-Met和Na2SeO3)处置前后Caco-2细胞的卵白质组差别,颠末PDQuest软件剖析失掉了30个差别明显的差别卵白质点,经质谱剖析判定失掉了7个触及细胞生长发育、能量代谢、抗氧化功能等方面的有生物学意义的差别卵白,辨别为磷酸丙酮异构酶(TSPisomerase)、T-庞大的卵白质1亚基ζ(TCPZ).核纤层卵白B1(Lamin-B1)、异质核核糖核卵白F(hnRNPF)、超氧化物比方化酶[Cu-Zn](Cu,Zn-SOD)、泛素联合酶E2K(E2K)和谷胱甘肽分解酶(GS)。按比较、亚硒酸钠、硒代蛋氨酸和纳米硒的次序,TSPisomerase、TCPZ、Lamin-B1、hnRNPF和Cu,Zn-SOD的表达具有差别水平的下调趋向,而E2K和GS的表达具有差别水平的上调趋向,而且除E2K外,纳米硒对别的卵白的表达调控出现与硒代蛋氨酸类似的作用结果。4、以硒代蛋氨酸为参比,停止了纳米硒对斑马鱼胚胎的毒性研讨,失掉了纳米硒对斑马鱼胚胎具有致畸效应,差别浓度硒溶液表露会使斑马鱼胚胎发生包罗体轴弯曲(AM)、心包水肿(PE)、卵黄囊水肿(YES)、游囊收缩不全(USB)、殒命等典范畸型。随着硒浓度及作用工夫的添加,纳米硒和硒代蛋氨酸诱导斑马鱼殒命的胚胎数以及畸形的胚胎数都出现添加趋向,经过盘算得出纳米硒在96hpf的LC50为7.18μmol/L,在120hpf的LC50为5.68μmol/L;DL-硒代蛋氨酸在96hpf的LC50为67.32μmol/L,在120hpf的LC50为54.66μmol/L。别的,在120hpf时纳米硒的TC50为3.27μmol/L,而DL-硒代蛋氨酸的TC50为44.22μmol/L。5、选用几种要害酶作为分子目标研讨了差别浓度纳米硒对其生机的影响。纳米硒表露下,依照0μmol/L、2μmol/L、6μmol/L的次序,斑马鱼胚胎的碱性磷酸酶(AKP)生机出现降落趋向,而且三组之间差别明显(P<0.05);同时,酸性磷酸酶(ACP)和Na+K+-ATPase生机也出现稍微的降落趋向,但三组之间差别不明显(P>0.05);谷胱甘肽-S转移酶(GST)生机是0μmol/L和2μmol/L组类似,而6μmol/L组分明降低,而且与0和2μmol/L组相比是差别明显的(P<0.05);总超氧化物比方化酶(T-SOD)生机是2μmol/L组比0μmol/L要大,而6μmol/L组又比2μmol/L组小,而且三组之间相比是差别明显的(P<0.05)。几种酶生机变革标明纳米硒影响斑马鱼胚胎的生长代谢、解毒才能以及抗氧化才能等。
【作者】严旭霞;
【导师】王彦波;
【作者根本信息】浙江工商大学,食品迷信与工程,2013,硕士
【要害词】纳米硒;Caco-2细胞;斑马鱼;双向电泳;生物效应;

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